分子生物学实验室

  上海交通大学医学院实验动物科学部实验室通过生物信息学和常规分子生物学方法克隆了兔HGPRT基因的全长DNA序列,应用RED重组技术(Redrecombineering)对含有兔HGPRT全基因的细菌人工染色体(bacterial artificialchromosome,BAC)进行遗传工程技术操作,成功测序了全长HGPRT基因组序列。经过几年的研究,目前本实验室的兔体细胞克隆效率也在不断的提高,这些均为利用基因打靶技术和体细胞核移植技术制备基因打靶兔疾病模型提供了理论和技术基础。

 

  有鉴于此,在本实验室前期研究基础上,探索兔体细胞和ES细胞基因打靶的适宜条件、制备HGPRT基因敲除兔、进而建立LNS兔疾病模型,就日益成为本实验室的研究重点。本研究建立在国际领先的家兔克隆和Red重组系统技术平台上,首先利用Red重组系统从兔BAC克隆上获得47Kb的全长HGPRT基因,然后在此基础上构建基因打靶载体(基因敲除和基因敲入),进而研究兔成纤维细胞和ES细胞基因打靶的适宜条件,获得HGPRT基因敲除和/或基因敲入的细胞系,然后经核移植技术获得HGPRT基因敲除和/或基因敲入克隆兔。本项目的完成不但为研究HGPRT基因缺陷疾病的致病机理和寻找新的治疗方法提供基础,而且也为通过Flp/Frt和/或Cre/LoxP位点特异性整合系统定点整合入人源药物蛋白的研究提供理论和技术基础,加快我国动物生物反应器研究步伐,同时也为更多家兔的定点基因突变疾病模型的制作进行有益的技术方法探索,上述研究也将使我国在兔克隆技术的发展和利用方面保持领先国际水平。

 

成果:

  在世界范围内,体细胞基因打靶克隆兔一直未成功,主要原因是兔克隆技术没有突破。在过去的几年里,本实验室在几个关键技术上都有重大进展:世界上首次成功获得成纤维体细胞克隆兔(2005)和兔类ES细胞克隆兔(2006);在2007年成功获得兔HGPRT全长基因组序列;利用Red重组技术,分析牛酪蛋白基因座位点和牛酪蛋白基因的表达调控;相关的工作结果都已发表在相关SCI杂志上。2007年世界上第一例转基因体细胞克隆兔成功。

 

 

 



    

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