小鼠胚胎冷冻实验服务
2011-08-23 16:24 浏览(1995

随着转基因和基因打靶小鼠品系和饲养量的迅速增加,特别是面临当前的动物房改建工程,动物科学部动物饲养设备一直出现紧张状况。冷冻保存可显著降低小鼠品系保种成本,并且能够保证珍贵的小鼠品系不会因遗传性状的漂变、疾病、不育、天灾人祸而造成巨大损失。为了进一步提高动物房使用效率,降低各个课题组的使用成本,加快动物饲养流通速度,有效缓解资源紧缺状况,实验动物科学部面向全校为各课题组提供小鼠胚胎冷冻等保存服务。

小鼠胚胎冷冻技术于1972年由Whittingham首次取得成功。胚胎冷冻就是将胚胎置于超低温环境中(-196℃)保存,使其新陈代谢及发育完全停止,但仍具有活力,一旦解冻、移植即可产生后代。目前,小鼠胚胎复苏存活率在80-90%,而胚胎移植率可达25%。利用胚胎冷冻复苏技术可以成功建立胚胎库,保存优良动物品系与濒危动物资源;可使胚胎移植不受时间与地点的限制;便于胚胎运输以取代传统的动物活体引进。

(一)冷冻原理
  胚胎在冷冻过程中,一方面细胞外水分首先形成冰晶,引起渗透压升高,使细胞脱水、蛋白质变性即产生所谓的溶液效应。另一方面,来不及渗出的水分在胞内 形成大的冰晶而致细胞死亡。胚胎冷冻是利用低温生物学原理,在胚胎冷冻前加入抗冻保护剂,充分平衡,并采用适宜的冷冻方法,以尽量避免冷冻过程中胚胎细胞 内大冰晶形成及胞外溶液效应达到有效冷冻保存胚胎的目的。
(二)胚胎冷冻方法
    冷冻的方法很多,可以归纳为缓慢降温法、快速冷冻法和一步冷冻(玻璃化冷冻)法三种。    

1.缓慢降温法
  在冷冻液中加入保护剂后,以0.2~0.8℃/分的速率降至-196℃后投入液氮。
2.快速冷冻法
  将装入细管的胚胎放入冷冻仪中,0℃平衡10分钟,以1℃/分的速度降至-5~-8℃,在此温度下诱发结晶,并平衡10分钟。然后以0.3℃/分的速度降温至-35~-38℃,投入液氮保存(实验动物科学部目前采用的方法)。
3.一步(玻璃化)冷冻法
  采用25%的甘油、丙二醇、乙二醇中的任何两种保护剂组成高浓度的玻璃化液。胚胎分两步移入低、高浓度的保护剂中,装入细管并在4℃平衡10分钟,然后直接或在液氮蒸气中放置1~2分钟投入液氮。

 

小鼠胚胎的冻存及复苏

主要服务:

        包括小鼠胚胎的冷冻,贮存及复苏。利用这一服务可以保存一些暂时不需要但具有一定价值的小鼠品系,减小维持种群的费用、降低设备损耗。另外,还可以防止因饲养和其他灾害带来的损失、基因漂移和基因污染等。 

基本要求:

1. 雄鼠:大于8周,小于10个月,一次冷冻需要数量10只左右;

2. 雌鼠:4-8周最佳, 一次冷冻需要数量10只左右;

每种处于半、杂合子阶段的转基因/基因敲除品系,至少冻存200-250个早期胚胎。纯合子,至少80-100枚。

 

小鼠冷冻保种需求的课题组请填写申请表并与我们联系。

邢老师:63846590-776508

蒋老师:63846590-776638

小鼠净化、冻存申请.doc



    

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